第136期 抗体纯化利器--东曹Ca++Pure-HA羟基磷灰石层析介质

第136期  抗体纯化利器--东曹Ca++Pure-HA羟基磷灰石层析介质

Ca++Pure-HA是一种由钙和磷酸盐组成的、用于分离生物分子的羟基磷灰石[Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂] 层析介质。Ca++Pure-HA颗粒，包括配基和填料骨架，都是由同一种材料来源同时形成，为工艺开发提供了无与伦比的选择性和分辨率。其高选择性可以分离电泳或其他层析模式难以分离的蛋白。

虽然Ca++Pure-HA的选择性和多相互作用模式显示了广泛的应用领域，但它最适合用于生物分子分离相关的应用。Ca++Pure-HA尤其适用于纯化单克隆和多克隆抗体，分离抗体的多种亚型、同工酶，纯化抗体片段，以及从双链DNA中分离单链DNA。

       Ca++Pure-HA层析介质是大孔径的球型羟基磷灰石六方晶体结构（图1）。经过高温烧结，提高了机械强度和化学稳定性，能够满足工业规模的应用要求。Ca++Pure-HA的强大特性使其可在高流速和大型层析柱中重复循环使用。

图1 Ca++Pure-HA的晶体结构

产品参数

工作原理

与钙基团的相互作用

※ 位于表面的钙基团带正电荷

※ Ca++Pure-HA 钙基团的工作原理类似于阴离子交换

与磷酸基团的相互作用

※  Ca++Pure-HA的磷酸基团带负电荷

※  与磺酸基和羧基等阳离子交换介质一样，Ca++Pure-HA的磷酸基团通过与带正电荷的氨基残基通过静电相互作用结合强碱性物质

应用

图2 Ca++Pure-HA的动态吸附载量

如图2所示，Ca++Pure-HA具有很高的动态吸附载量（DBC）。在5%的穿透率下，驻留时间为4分钟时，对人IgG的DBC大于40g/L。

图3使用 Ca++Pure-HA精纯IgG样品（来自Protein A纯化后收集的组分）

Ca++Pure-HA使用氯化物等洗脱缓冲溶液可有效去除mAb中的聚集体和降解物，如图3所示。分析结果显示单体峰和聚集体峰之间具有较高分辨率。

图 4 使用Ca++Pure-HA纯化前后IgG样品的SEC分析

图4显示的是在Ca++Pure-HA上纯化前后的SEC分析谱图，聚集体和降解物明显减少。HPLC分析的数据汇总如表1所示。

表1 使用Ca++Pure-HA及KCl洗脱缓冲溶液减少的IgG聚集体和片段

         Ca++Pure-HA在0.5mol/L NaOH中具有良好的耐碱性，即使超过65个CIP循环后，其动态吸附载量也没有明显降低（图5）。图中为使用1.0 mol/L NaOH，每经过5个CIP循环后测得的溶菌酶的动态吸附载量。

图5 Ca++Pure-HA的耐碱性

Ca++Pure-HA层析介质具有卓越的分离特性以及无与伦比的选择性和分辨率，可以在捕获阶段到最终精纯的任何步骤中灵活应用，为纯化工作者在分离生物分子时提供了更好的选择。

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