His标签蛋白纯化亲和介质选择指南
过渡态金属离子（Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+ ）能够与电子供体，如N、S、O 等原子以配位键结合，金属离子上剩余的空轨道是电子供体的配位点，在溶液中会被水分子或阴离子占据，当蛋白质表面氨基酸残基（His）与金属离子的结合力较强时，氨基酸残基的供电原子就会与金属离子结合形成复合物，取代原先结合的水分子或阴离子，这样就能使蛋白质分子结合在固体表面。His标签蛋白的His和介质结合，由于蛋白质表面的氨基酸的种类、数量、位置和空间构象不同，因而具体使用时根据金属配基的亲和力大小不同，选择不同的金属配基进行分离纯化。
His标签蛋白纯化亲和介质对比
名称 | Ni-IDA | Ni-IMAC | Ni-TED |
螯合比例 | 3:3 | 4:2 | 5:1 |
还原剂（mM） | 避免使用 | 5 | 20 |
螯合剂（mM） | 避免使用 | 1 | 100 |
pH范围 | 3-12（工作） 2-14（清洗） | 3-12（工作） 2-14（清洗） | 3-12（工作） 2-14（清洗） |
清洗再生 | 9步 （脱镍-清洗-再生） | 9步 （脱镍-清洗-再生） | 5步 （清洗） |
适用范围 | 常规His标签蛋白纯化 （活性条件） | 常规His标签蛋白纯化 （活性条件和变性条件） | 可用于含有高还原剂、螯合剂His标签蛋白样品和真核分泌His标签蛋白纯化 （低丰度样品及含有变性剂样品使用效果降低） |
货号 | 产品名称 |
HZ1003-7 | Ni 6FF（IDA） |
HZ1003-10 | IDA 6FF |
HZ1003-5 | Ni 6FF (IMAC) |
HZ1003-6 | Ni 6HP (IMAC) |
HZ1003-8 | Ni 6FF (TED） |
HZ1007-2 | IMAC 6FF |
HZ1003-9 | TED 6FF |
