常见天然类黄酮色素的分离纯化及应用实例
类黄酮色素的应用开发现状
许多的天然类黄酮色素都是对人体有益的天然活性成分，具有抗氧化、预防心血管疾病、防癌、抗炎等多种生理功效，特别在医药方面，有良好的应用和开发前景。
色素类黄酮化合物广泛分布于植物界，几乎绝大多数植物都能合成黄酮类。近年来，人们对类黄酮化合物的抗氧化功能和机理进行了比较深入的研究，证实该类化合物是一种很强的活性氧自由基清除剂。迄今已发现了 2000 多种黄酮类化合物，它们多数以甙的形式存在，少数以游离形式存在。黄酮类化合物泛指具有 C6－C3－C6 基本骨架的化合物，包括黄酮、黄酮醇、异共同酮、查尔酮及它们的二氢衍生物和黄烷醇等。主要有本犀草素、芦丁、橘皮色素、红花黄色素、原花青素等。
类黄酮色素的分离纯化方法
天然黄酮类色素多有酚羟基取代，因此是极性较强的化合物。按照相似相溶原理，可溶于极性化合物，所以对天然黄酮类色素的提取一般用甲醇、乙醇、丙酮水溶液等极性溶剂。
对于花色素类用酸性极性溶剂提取，以保持它的稳定性。
柱层析是分离纯化天然黄酮类化合物的一种主要工具。以前的研究中通常用聚酞胺、硅胶、氧化铝等做填充料，由于这些材料吸附量大，前处理烦琐，回收率低等缺点，现极少应用。对于酚类化合物的分离纯化现阶段普遍使用的填充料是交联葡聚糖凝胶。
LH‐20(SePhadexLH‐20)分离黄酮类色素特性如下:
交联葡聚糖凝胶是一种高度交联的葡聚糖，在它上面可以根据分子筛效应将物质，以分子大小递减的次序洗脱得以分离。其中羟基丙醇葡聚糖凝胶(即 SePhadexLH‐20)是通过葡聚糖与甘油聚合，在分离花色素、黄酮类化合物得到了成功的应用。
Sephadex LH‐20 是羟基丙醇葡聚糖凝胶，适用于纯化一些植物次生代谢产物，不但具有分子筛效应，还可以在极性与非极性溶剂组成的系统中起反相层析的作用，所以，它结合了凝胶、分配色谱、吸附层析于一身，能分离结构相近的分子。Sephadex LH‐20 有较强的吸附能力和分辨能力，以水一乙醇为流动相进行梯度洗脱，反复分离，可以对花色素、多聚体花色素进行比较单一的分离。
用 Sephadex LH‐20 分离黄酮类化合物的机理是:分离黄酮苷元时，主要是吸附起作用，分离次序取决于游离酚羟基的数目;分离黄酮苷时，分子筛起作用，相对分子质量的大小或含糖的多少决定化合物被分离的次序。黄酮昔元游离酚羟基越多，越难以洗脱，相对分子量越大，苷元上连接的糖越多，越容易洗脱。
在前处理上，SePhadexLH‐20 可以用有机溶剂溶胀而不影响它的溶胀度，在分离样品时改变洗脱的极性。当分离结束后，再用大量水一丙酮(l:l)冲洗，可以吸附再生后重复使用，分离效果保持十几年不变。
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