第六十一期 耐盐型阴离子交换层析介质TOYOPEARL NH2-750F

耐盐型阴离子交换层析介质TOYOPEARL NH₂-750F

细胞培养基由类似于生理离子强度的0.1-0.15mol/L的NaCl构成。在这种离子强度条件下，样品很难被离子交换填料吸附，所以样品一般要通过脱盐处理后才能上样。如果有一种离子交换填料能够在0.1 mol/L NaCl以上的盐浓度条件下也可以吸附样品的话，样品将无需脱盐直接上样进行分离，从而大幅简化操作和成本。

这样的填料被称为“耐盐型”离子交换填料，在某种意义上类似于混合模式的填料。

混合模式填料的特点

1. 同时具有离子交换和疏水作用基团。

2. 在盐浓度较高的缓冲液中仍能吸附蛋白——盐耐性。

3. 阴离子型混合模式填料。一般情况下，疏水模式的结合占主导地位，但是TOYOPEARL NH₂-750F这款填料，阴离子交换模式的结合占主导地位。

4. 阳离子型混合模式填料。离子交换模式的结合占主导地位，TOYOPEARL MX-Trp-650M混合模式填料具有很高的吸附载量。

产品规格参数

层析柱：6mmI.D.×40mm

缓冲液：0.02mol/L Bis-Tris-HCl（pH 6.0）+0.15mol/L NaCl

样品：BSA（2g/L），

柱留时间：1min

产品应用

1.  耐盐型的纯化分离（单克隆抗体、其他）

n  NaCl浓度超过0.15 mol/L的缓冲液中，仍然可以吸附蛋白样品。

n  样品原液可以直接上样，无需稀释。

n  通过穿透法或者梯度洗脱法去除多聚体。

n  匹配IgG和生物大分子样品的大孔径层析介质。

2.  层析条件

n  缓冲液的pH值要低于目标蛋白的pI（等电点）。

n  缓冲液中加入盐可能会增加吸附载量。

n  上样缓冲液的pH值越高，缓冲液的最高盐浓度可达0.3 mol/L。

n  不同于普通阴离子交换填料的吸附力和选择性。

混合模式填料和传统的高载量离子交换填料的区别

1. 传统的高载量离子交换填料TOYOPEARL GigaCap系列，在低盐浓度下, TOYOPEARL GigaCap系列具有非常高的吸附载量。

传统的离子交换填料，粒径越小，分辨率越高（Superfine级：35μm。TOYOPEARL GigaCapS-650S, GigaCapQ-650S，TOYOPEARL DEAE-650S, SuperQ-650S, SP-650S, CM-650S）

2. 混合模式填料需要优化分离条件。上样和洗脱缓冲液需要对溶液中的盐浓度和pH值进行优化。在0.1~0.3 mol/L NaCl溶液中能够吸附蛋白是比较理想的条件。需要利用盐和pH梯度进行更有效的洗脱。相较于传统的离子交换填料，清洗条件更为苛刻。优化层析条件可以提供更好的分离选择性以去除杂质。

TOYOPEARL NH₂-750F

结论

1. TOYOPEARL NH₂-750F耐盐型离子交换填料，在0.15 mol/L NaCl甚至更高的盐浓度下都表现出了相当高的吸附载量。

2. 酸性蛋白在低于等电点的酸性条件下依然能被吸附。

3. 这款填料可以使用线性梯度或者穿透模式来去除抗体中的多聚体。

4. 在0.5 mol/L NaOH下稳定。

5. 避免使用多价阴离子或低盐浓度的缓冲液上样。

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