一、单抗的概念
一种抗体分子是由一个B 淋巴细胞分化增殖而形成的浆细胞系产生的。由一个细胞增殖而形成的具有相同遗传特征的细胞群叫做“克隆”。由一个浆细胞大量增殖形成的克隆产生的抗体称单克隆抗体（Monoclonal antibody，McAb），简称单抗。这种抗体分子组成均匀，特异性单一。用杂交瘤技术制备出来的单克隆抗体纯度高、专一性强、效价高。
二、层析工艺的确定
各种模式中，Protein A亲和层析法可获得高纯度的单抗，因此普遍用于初始纯化步骤（即初期捕获）中。离子交换层析法 ( IEC ) 的高载量特点也使之在抗体的制备纯化中被广泛采用。疏水相互作用层析法 ( HIC ) 具有去除抗体多聚体以及脱落的蛋白 A 配体等杂质的性能。混合模式层析法（MXC，含羟基磷灰石类分离介质）也被运用到了抗体的层析纯化工艺之中。
三、层析填料的选择
聚合物基质具有一定的疏水性，非特异性吸附低，回收率高；刚性好，高流速下柱床体积稳定，易于工业放大使用。
分离模式 | 特长及用途 | 层析填料 |
亲和层析（AFC） | 专为单克隆抗体的分离纯化而设计的亲和层析填料，是目前比较主流的用于捕获阶段的层析模式。 | 推荐型号： TOSOH聚合物基质： Toyopearl AF-rProtein A -650F， Toyopearl AF-rProtein A HC-650F 参考型号： GE琼脂糖基质： rProtein A Sepharose FF，nProtein A Sepharose 4FF MabSelect，MabSelect SuRe |
离子交换（IEC） | 去除抗体中的多聚体，以及一般蛋白、血浆蛋白、病毒、疫苗等生物大分子样品的分离纯化。 | 阳离子交换 推荐型号： TOSOH聚合物基质： Toyopearl GigaCap S-650M，Toyopearl MX-Trp-650M 参考型号： GE琼脂糖基质：Capto S |
阴离子交换 推荐型号： TOSOH聚合物基质： Toyopearl GigaCap Q-650M，Toyopearl NH2-750F 参考型号： GE琼脂糖基质：Capto Q，Capto adhere | ||
疏水相互作用（HIC） | 去除抗体中的多聚体 | 推荐型号： TOSOH聚合物基质： Toyopearl PPG-600M，Butyl-600M，Phenyl-600M 参考型号： GE琼脂糖基质：Phenyl Sepharose 4FF |
四、层析设备的选择
选用Contichrom层析系统，可运行多种层析模式，如标准批处理过程、Capture SMB、MCSGP（多柱逆流溶剂梯度纯化）、N-Rich等，可使层析填料、缓冲液等成本投入大为节省，同时也使得纯化周期大为缩短。
Capture SMB应用于Protein A捕获环节，采用连续上样，可保证填料利用率最高，填料用量节省50%，从而使得成本投入大为缩减。
MCSGP工艺应用于去除降解物和聚合体的精纯环节，可将含有不纯组分的产品回收在一个封闭的环内，进行循环式的层析操作，从而最大限度地提取纯产品，使得收率和纯度二者兼得。
Contichrom系列产品线齐全，具有可满足高压制备的规格，最高系统耐压为100 bar（10 MPa），也具有为工业层析分离设计的产品，实现工艺的有效线性放大。
五、单抗HPLC分析中色谱柱的选择
分离模式 | 分离原理 | 特长及用途 | 推荐色谱柱 |
尺寸排阻（SEC） | 分子的空间尺寸 | 单抗分子量通常在150kDa左右。适用于抗体的单体与多聚体（二聚体以上）的分离，或者单体与抗体降解产物的分离。有时也可将2根色谱柱串联使用。 | TSKgel SuperSW mAb HTP TSKgel SuperSW mAb HR TSKgel UltraSW Aggregate TSKgel G3000SWXL TSKgel SuperSW3000 |
离子交换（IEC） | 分子的离子性 | 抗体纯化产物中，即使是分子量相同的组分也可能存在电荷异构体（脱酰胺化、末端氨基酸突变）和糖链构造异构体等杂质。此类色谱柱采用了非多孔类填料，可以获得高分辨率、快速的分析。 | TSKgel CM-STAT TSKgel SP-STAT TSKgel Q-STAT |
疏水相互作用（HIC） | 分子的表面疏水性 | 在抗体药物中，对于一些由于等电点相同而无法通过离子交换色谱法实现分离的、但表面疏水性有差异的结构同分异构体、二聚体和多聚体等，可以考虑使用HIC实现分离。 | TSKgel Butyl-NPR TSKgel Phenyl-5PW |
反相（RPC） | 分子的疏水性 | 适用于分析还原后的抗体重链轻链以及其他的降解产物。 | TSKgel Protein C4-300 |
亲水相互作用（HILIC） | 分子的亲水性 | 适用于分析结合在抗体上的糖链的结构差异性。 | TSKgel Amide-80 TSKgel NH2-100 |
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