糖类物质的分析和制备,在液相色谱领域占有重要的地位。迄今为止,大多数的分离介质仅仅局限在分析级别。但是富士硅胶研发出用于制备色谱的新的氨基硅胶。当使用高水相为流动相时,一般的氨基填料会暴露出很多问题。氨基硅胶的pH值很高,一般pH为9.0,在这样高的pH条件下,目标化合物一般都会变性,并且会毁坏硅胶基质的表面。考虑到这些问题,富士公司研发出新的氨基硅胶填料,称之为NH SG硅胶。NH SG硅胶可以最小化甚至是避免上述问题,并且对糖类化合物进行更好的分离。
物理特性
NH SG硅胶有3种级别的填料用于制备应用:
-- NH SMB 100-20/45SG 用于保护柱,HPLC色谱柱
-- NH MB 100-40/75SG 用于Flash柱,保护柱
-- NH MB 100-75/200SG 用于开放柱
下表列出了富士NH SG硅胶的一些物理特性。这些填料是键合在氨基硅胶上,并且pH中性。
| NH SMB 100-20/45SG | NH MB 100-40/75SG | NH MB 100-75/200SG |
硅胶基质 |
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比表面积 m2/g | 300 | 300 | 300 |
孔容 ml/g | 0.80 | 0.75 | 0.75 |
粒径 μm | 30 | 60 | 110 |
NH SG |
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堆积密度 g/ml | 0.63 | 0.63 | 0.63 |
pH | 7.5 | 7.5 | 7.5 |
中性化合物的分离
对于中性化合物,NH SG硅胶和富士的NH硅胶有着相似的分离色谱行为。
糖类物质的分离
众所周知,NH官能团会和酮或者羧基发生反应。但是,NH SG硅胶填料可以在有机相/水的流动相体积下分离大多数的糖类化合物,而不发生上述化学反应。NH SG硅胶在正相条件下使用,尤其是亲水相互作用模式(HILIC)。作为典型的HILIC模式,在增加水相比例的条件下,洗脱增强。以下的分离应用数据,使用的就是乙腈/水体系。
TLC和HPLC的预实验
在使用NH MB 100-75/200SG填料之前最好做一下预实验。以下是使用NH 薄层板和NH2 SPS 100-5SG做的预实验。
溶剂条件
糖类的分离通常用到的是乙腈/水做流动相。当乙腈的含量增加,保留因子k’增加。但是乙腈的含量需要仔细的控制,因为随着乙腈含量的增加,样品的溶解性会变差。
2-1 寡糖的制备
3. 环糊精的分离
3-1 环糊精的制备
3-2 Fraction A的分析
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